1522年7月20日，古蒂尼奥率6艘大帆船和300名官兵离开马六甲，前往中国报复。9月，舰队直闯广州，企图以武力迫使广东官府同意恢复通商和修筑要塞。但在途径新安县域海面时遭到中国海军的拦截。经过一场短促的激烈战斗，葡方2只大帆船被俘获，42人被生擒。葡舰队于10月中仓皇遁回马六甲。葡萄牙的征服中国梦随之破灭。至此，葡萄牙人全被逐出。
两次惨败让葡萄牙人意识到中国并非当时非洲或东南亚那些弱无还手之力的小国，而是一个有着强大军事潜力的对手。此时，葡萄牙由于多年的醉心扩张，加上王室贵族的穷奢极侈，国力已渐渐难支，在东方扩张的势头已经是强弩之末，甚至连业已占领的殖民地也在逐渐丢失，无法再对中国的进攻上投入更多资源。所以其对华政策开始转向务实，绕过中央政府，更多地与地方官绅直接打交道。
葡萄牙人的袭扰让明朝廷也感到震动，从而在进一步加强广东沿海的防御力量的同时，宣布广东厉行海禁。自此之后一直到侵占澳门的31年时间里，葡萄牙人几乎再也没有重返广东。
不过一些带有海盗色彩的葡萄牙商人并没有停止冒险。1553年，葡萄牙人通过谎称借地晾晒被水打湿的贡物，并重金贿赂当地官员的情况下，“借居”了澳门，之后又逐渐改为租居，从1849年起，借助列强势力，乘中国鸦片战败之危，拒缴地租，就这样又强住了150年。
